白新鹏博士工作室

海南大学食品学院 海南省食品研究所

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动物蛋白质饲料消化率的测定胃蛋白酶法

GB/T 178111999

前 言

本标准等效采用美国公职分析化学家协会(AOAC)(1995 年版)《动物蛋白质饲料的胃蛋白酶消化率测定方法 过滤法》。

在技术内容上,原方法中所用的“恒温搅动器”,根据实际情况改用“恒温平转摇床”;再则,限于国内试剂条件,选用市场上易购的胃蛋白酶试剂(1:3000)代替原方法指定的胃蛋白酶试剂(1:10000)。

本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。

本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。

本标准主要起草人:屈利文,钱肪。

中华人民共和国国家标准

动物蛋白质饲料消化率的测定胃蛋白酶法

Determination of digestibility in animal protein feedsPepsin method

1 范围

本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。

本标准适用于所有动物性蛋白质饲料,不适用于植物性蛋白质或混和饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。

2 引用标准

下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有

效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 64321994 饲料中粗蛋白测定方法

GB/T 64321994 饲料粗脂肪测定方法

GB/T 64821992 分析实验室用水规格和试验方法

3 方法原理

脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液,在恒温、持续不断地搅拌下消化16h,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣地粗蛋白含量。同时,测定空白和脱脂未酶解试样地粗蛋白含量。

4 试剂

本标准所用试剂,除特殊说明外,均为分析纯实验室用水应符合GB/T 6682中三级水的规格。

4.1 0.2%胃蛋白酶溶液:将6.1ml浓盐酸稀释至1000ml水中(溶液pH12),加热至4245,加入2g活性为1:10000 生化级胃蛋白酶〔若活性不是1:10000,可使用活性1:3000 生化级胃蛋白酶1(不可使用

非生化级胃蛋白酶),应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU,并缓慢搅拌直至溶解。勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前钱配制。

4.2 乙醚。

4.3 丙酮。

4.4 定氮试剂:按GB/T6432中试剂及配制方法规定

采用说明:

1AOAC中制定为1:10000

5 仪器、设备

5.1 恒温式平转摇床1:温控范围2050,水浴式或空气浴式均可,转速可调(15300r/min)。

5.2 实验室用样品粉碎机。

5.3 索氏抽提器、脱脂设备:按GB/T 6433中仪器、设备规定。

5.4 定氮仪器、设备:按GB/T 6432 中仪器、设备规定。

5.5 实验室常用仪器、设备。

6 试样制备

取具有代表性试样,用四分法缩分至200g,然后粉碎至全部过0.90mm孔筛(20目),混匀装于密封容器,保存备用。

7 测定步骤

7.1 脱脂

称取12g 试样用乙醚(4.2)脱脂(含脂肪小于1%可不脱脂,含脂肪1%~10%建议脱脂,含脂肪大于10%则必须脱脂)。脱脂方法可参照GB/T 6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。

7.2 胃蛋白酶消化

称取脱脂烘干(7.1)后的样品若干克(精确至0.0002g,含氮量约580mg)于250ml 带盖磨口瓶中,加150ml新配制的并已预热至4245℃的胃蛋白酶溶液(4.1),要确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿,盖紧瓶盖,将瓶夹于恒温摇床(5.1)上,于45℃恒定搅动16h进行保温消化。

7.3 消化残渣的处理

从搅动器上取下磨口瓶,呈45°角放置,让残渣沉淀15min以上,随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上抽滤,先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上,再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上,慢慢倾出内容物,使之通过滤纸后形成连续的细流,避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。当上层液体通过滤纸后,于瓶中加入15ml丙酮,用拇指盖住瓶口剧烈振摇,放开。再用拇指堵住瓶口,在滤纸上方将瓶倒置振摇,放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤,照上法振摇和倒出。检查瓶子,并用丙酮在此洗涤。当全部液体通过滤器后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸,无损的移入凯氏烧瓶中,并将凯氏烧瓶置于105℃烘箱内

烘干。

7.4 粗蛋白的测定

将上述(7.3)烘干的残渣按GB/T 6432中方法测定粗蛋白含量(W2)。同时,称取脱脂烘干(7.1)后的样品若干克(精确至0.0002g,含氮量约580mg),直接按GB/T 6432 方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白的含量(W1

采用说明:

1AOAC方法中,规定使用“恒温搅动器”。GB/T 178111999

8 分析结果的计算及表示

8.1 结果按式(1)计算

  X(%)=W1W2/ W1×100 ……………………… (1

式中:X――试样的胃蛋白酶消化率,%

W1――脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量,%

W2――脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量,%

所得结果表示到小数点后一位。

8.2 允许差

每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定,以其平均值为测定结果。

测定结果得相对偏差按GB/T 6432中粗蛋白测定得相对偏差允许范围。

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