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隆丁蛋白质区分方法

隆丁蛋白质区分
1 原理
高分子含氮物质在酸性溶液中,易为单宁所沉淀。磷钼酸可同时沉淀高、中分子含氮物质。低分子含氮物质则不为上述物质所沉淀。因此,光测单宁沉淀样品后所得的滤液的含氮量,从总氮减去此值即得高分子氮。再测磷钼酸沉淀样品后所得滤液的含氮量即为低分子氮。用单宁沉淀样品所得滤液的含氮量减去低分子氮,即为中分子氮。
2 仪器
总氮测定仪。
恒温水浴 20±0.1℃
3 试剂:
总氮测定用试剂
硫酸,密度1.4(100g 98%硫酸加入92 克水)
单宁溶液 溶16g单宁于100ml水中。
钼酸钠溶液 溶50g钼酸钠于100ml水中。
4 操作:
4. 1 测样品在水中的可溶性氮
a、 将1g样品溶于100ml水中,20℃水浴1h,折叠滤纸反复过滤,直至滤液澄清。
b、取滤液50.0ml,用定氮仪测其总氮。(所得数据×4)为样品水中可溶性含氮物质的含量,即为可溶性蛋白含量A。
4. 2 用单宁沉淀
a、取1g样品,加入100ml水,置于一200ml 容量瓶中,加水到180~185ml,加密度1.4 硫酸4ml,摇匀。
b、置容量瓶于20℃水浴中,保温15~20min,加10ml单宁溶液,加水到刻度,摇匀,立即用折叠滤纸过滤,此滤液可重复过滤,直至澄清。
b、 取滤液50.0ml,用定氮仪测其总氮。(所得数据×4)为中低分子含氮物质的含量,即为中低分子蛋白含量B。
4. 3 用磷钼酸沉淀
A、取1g样品,加入100ml水,置于一200ml 容量瓶中,加水到175ml左右,加10ml钼酸钠溶液,摇匀。
B、置容量瓶于20℃水浴中,保温15~20min,加10ml密度1.4 硫酸,加水到刻度,摇匀,立即用折叠滤纸过滤,此滤液可重复过滤,直至澄清。
C、 取滤液50.0ml,用定氮仪测其总氮。(所得数据×4)为低分子含氮物质的含量,即为低分子蛋白含量C。
5 计算
三个区分中蛋白所占的比例分别为:
高分子蛋白含量(%) = (A-B)/A;
中分子蛋白含量(%) = (B-C)/A;
低分子蛋白含量(%) = C/A;
6 结果表示:以%表示之,取一位小数。
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